Removal of Debris and Red Blood Cells from CNS Cell Suspension of EAE Mice

首先，在中枢神经系统组织解离后获得细胞沉淀，并在一个 15 毫升管中用 3， 100 微升 DPBS 重新悬浮。不要涡流。将 1， 800 微升来自成人脑解离试剂盒的碎片清除溶液添加到两个混合的 CNS 细胞悬液中。

倒置试管并混合悬浮液，然后用 4 毫升冷 DPBS 轻轻覆盖它并观察清晰的梯度。在3,000g下，在4摄氏度下将试管离心10分钟，完全加速且不中断。离心后，形成三相。

完全吸出两个顶部相并丢弃它们，确保没有髓鞘残留物。用高达 14 毫升的冷 DPBS 填充管子并关闭它。在工作台上用力倒置试管，直到细胞沉淀从试管底部分离。

离心样品并完全吸出上清液。对于红细胞去除，在细胞沉淀中加入 1 毫升红细胞去除溶液。重新悬浮沉淀后，将溶液在4摄氏度下孵育10分钟。

然后加入10毫升冷PB缓冲液，离心样品，完全吸出上清液。对于细胞计数，将细胞悬液在PB缓冲液中稀释50倍，然后在0.4%台盼蓝溶液中稀释1至10倍。然后使用改进的计数室确定细胞计数。