Collection and Washing of Sperm from the AcroSensE Mouse Model for Real-Time Imaging

首先从附睾中收集精子，从表达AcroSensE的转基因模型小鼠中分离出来。在含有0.5毫升MW培养基的3.5厘米组织培养皿中进行精子收集，在37摄氏度下进行15分钟的游出程序。然后使用细镊子小心地从游泳收集盘中取出任何附睾组织。

将含有精子的培养基转移到15毫升锥形管中，并使用摆动桶转子在室温下以100G离心悬浮液一分钟。在塑料移液管的帮助下，收集含有精子的MW上清液，同时丢弃任何粗大组织碎片颗粒并将其转移到圆底管中。通过加入预热至37摄氏度的500微升MW培养基，将上清液体积调节至1毫升。

在室温下将该混合物在圆底管中以400G离心8分钟。然后小心地取出上清液，同时留下松散的颗粒精子。使用大口径传输管，通过手动轻敲管（称为手指轻弹）重新悬浮精子。

一旦精子均匀地重新悬浮，将它们转移到一个新的圆形底管中。