SWITCH - H2O2 - Antigen Retrieval - TDE (SHORT) Tissue Transformation Technique

首先将福尔马林固定、石蜡包埋的脑切片放入带螺旋盖的培养皿中。将关闭溶液连接到盘子上，用铝箔盖住它们，并在摇动一天的同时在四摄氏度下孵育。第二天，将所有样品转移到新培养皿中，并用如前所述的开启溶液孵育它们。

孵育结束时，将样品放入试管中，并在摇动的同时用PBS洗涤三次，持续两小时。然后向样品中加入灭活溶液，并在 37 摄氏度的水浴中孵育过夜。进行三次洗涤后，向样品中加入澄清溶液，并在 55 摄氏度的水浴中孵育三至七天。

在孵育结束时，在培养箱中用 37 摄氏度的 PBST 洗涤样品三小时。第二天，向每个样品中加入 10 毫升 30% 过氧化氢，并在室温下振荡时用 PBS 洗涤样品 3 次，每次 10 分钟。接下来，在水浴中将抗原修复溶液预热至95摄氏度。

将样品转移到加热的溶液中，并在 95 摄氏度下孵育 10 分钟，然后在室温下在振荡器上孵育 40 分钟。在摇晃的同时用去离子水洗涤样品五分钟。在PBS中平衡样品。

现在将样品转移到带螺旋盖的培养皿中。在烧杯中为所有样品制备新鲜的一抗溶液后，将其添加到样品中，并在 37 摄氏度下孵育 1 至 7 天，在黑暗中轻轻摇动。然后将样品放入试管中，并在培养箱中使用预热的 37 摄氏度的 PBST 洗涤它们。

将样品移至带螺旋盖的培养皿中，并加入在PBST和0.01%叠氮化钠中制备的二抗。将样品转移到试管中，并在摇动的同时用预热的PBST在37摄氏度下洗涤三次，持续两小时。对于折射率匹配，将样品放入新培养皿中并加入 30% 的 TDE 溶液。

然后用样品中的68%TDE溶液代替30%TDE，并在室温下摇匀。经过短暂的处理后，所有组织切片在灰质和白质中都实现了最佳和均匀的透明度。