Diatom DNA Extraction from Water Sample and Human Lung Tissue Using a Modified DNA Extraction Kit

首先，在离心管中取 10 毫升硅藻水样品。将试管以13,400G离心五分钟。用移液枪小心地丢弃9.8毫升上清液。

然后将 200 微升富集的硅藻水样品转移到 2 毫升离心管中。接下来，从溺水的人体中取出 0.5 克肺边缘组织。用剪刀剪断肺组织，直到它变得浑浊。

对于从硅藻和肺样本中提取 DNA，首先在两个样本中加入玻璃珠。充分混合样品后，向试管中加入 40 微升蛋白酶 K。在室温下孵育 15 分钟后，向两个试管中加入 200 微升结合缓冲液。

立即用涡旋混合器混合样品四分钟。然后将试管放入 70 摄氏度的水浴中 10 分钟。直到解决方案变得清晰。

接下来，将澄清溶液与絮凝沉淀物转移。放入三厘米长的吸附柱中，填充硅基体。将色谱柱以 8， 000 g 离心 30 秒。

然后将收集管中的废液丢弃，并将色谱柱放回收集管中。现在向色谱柱中加入 500 微升抑制剂去除缓冲液，并以 13， 400 g 离心 30 秒。弃去废液后，向色谱柱中加入700微升洗涤缓冲液，再次离心。

丢弃废液后，将吸附柱放回空收集管中。将色谱柱以14,500 G离心两分钟，以尽可能多地去除洗涤缓冲液。现在将色谱柱取出，放入干净的离心管中。

向吸附膜的中间部分加入100微升洗脱缓冲液。在室温下孵育五分钟后，将色谱柱以 13， 400 g 离心一分钟。在再次离心之前，将收集管中获得的溶液转移回吸附柱中。

将洗脱的硅藻 DNA 储存在 2 到 8 摄氏度下以备将来使用。琼脂糖凝胶电泳显示，PCR扩增后，水样和组织中的硅藻DNA条带在250至500 BP之间。