首先，将放置在层流罩中的移液器站的参数设置为 1， 900 伏，20 毫秒（一个脉冲）。小心地从包装中取出转染管以保持无菌，并填充三毫升 E 缓冲液。为了准备细胞进行电穿孔，从细胞中取出生长培养基并使用PBS洗涤它们，以去除促进粘附的血清和二价阳离子。
然后向细胞中加入PBS和一毫摩尔EDTA的混合物，并在室温下孵育约五分钟，直到细胞开始分离。轻轻地上下移液以分离细胞并将细胞转移到低蛋白结合的 15 毫升管中。将细胞以 500 G 沉淀五分钟。
离心后迅速除去大部分上清液，在试管中留下约一毫升的上清液。将细胞重悬于剩余的上清液中，并将其转移到低蛋白结合的1.5毫升微量离心管中。取出一小等分的细胞进行计数，并在室温下以500G离心5分钟的方式沉淀剩余的细胞。
在离心过程中计数细胞。在20毫摩尔Cas9溶液中取1x sgRNA，并将试管加热至室温。离心后，从细胞沉淀中除去所有上清液，并将细胞重悬于浓度为每毫升4000万个细胞的氯化钙和氯化镁的PBS中。
对于 sgRNA Cas9 核糖核蛋白复合物组装，在灭菌的 PCR 管中向 1 μL 稀释的 Cas9 中加入 2.5 μL sgRNA，并缓慢分配 sgRNA，混合约 15 秒以防止沉淀。在室温下孵育五分钟，以形成核糖核蛋白复合物。要通过电穿孔递送核糖核蛋白复合物，请通过按下柱塞以延长阀杆来准备电穿孔尖端。
然后将阀杆插入尖端。通过上下移液重悬细胞。将电穿孔尖端与电池一起加载，并抽出尖端的全部 10 微升体积容量。
从阴性对照 sgRNA 开始，将电穿孔尖端中的 10 μL 细胞转移到含有 3.5 μL 核糖核蛋白的样品管中。上下移液三次以充分混合，然后将 10 微升混合物吸回吸头。将尖端放入电穿孔站，将其放入缓冲液中，然后按触摸屏显示器上的开始。
完成后，显示屏将指示脉冲成功。从设备中取出移液器，并将细胞置于未包被的12孔板的干孔中。在含有氯化钙和氯化镁的 15 毫升 PBS 中上下移液两次冲洗吸头。
将移液器放在一边，吸头仍然连接。立即向细胞中加入一毫升先前等分的无抗生素培养基，轻轻摇动板混合。这里显示了来自骨髓衍生巨噬细胞的 Rosa 26 位点的代表性 Sanger 测序色谱图，这些巨噬细胞用受控的非靶向 sgRNA Cas9 核糖核蛋白、Rosa 26 特异性 sgRNA 以及编辑的巨噬细胞中的 Src 和 Cblb 基因电穿孔。
通过PCR和Sanger测序对靶基因的分析显示，Cas9切割位点下游的每个位置都有多个核苷酸。这些结果验证了多个靶向基因的高编辑效率。
