Drug Screening Using Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs) and Cell Lysate Preparation for mRNA Sequencing

首先，将PBMC的冷冻瓶在37摄氏度的水浴中解冻两到三分钟，同时轻轻倒置。然后将解冻的细胞转移到 50 毫升锥形管中。用一毫升温热的完全生长培养基冲洗冷冻小瓶，并将溶液滴加到锥形管中的细胞中以执行第一个稀释步骤。

现在将细胞悬浮液离心五分钟，并流畅地倾斜锥形管以除去上清液。将细胞重悬于三毫升温暖的完全生长培养基中。对于细胞计数，将 10 μL 细胞悬液与台盼蓝混合。

使用 10 μL 染色细胞溶液计数细胞，使用自动细胞计数仪或细胞室对细胞进行计数。使用温暖的完全生长培养基稀释细胞，以达到每毫升 10 到 6 个细胞的 1 倍 1 倍的最终浓度。然后将 100 μL 细胞悬液接种到 96 孔细胞培养板的每个孔中。

向每个孔中加入100微升两次药物稀释液。要收获细胞，将细胞培养板离心 10 分钟。使用真空泵除去上清液，同时将泵头放在孔的下角以保留细胞。

现在向每个孔中加入 200 微升冰冷的 PBS。离心板五分钟后，取出上清液。然后向每个孔中加入 15 μL 裂解缓冲液。

使用不干胶密封膜，密封板以防止污染。涡旋板并离心一分钟。最后，在PCR板中收集6微升裂解的细胞溶液。