首先，将 25 毫米玻璃盖滑块放入六孔细胞培养板的孔中。在每个盖玻片的中心放置一滴聚赖氨酸。孵育完成后，用蒸馏水清洗每个盖玻片三次。
然后用无钙盐水清洗盖玻片两次。接下来，将盖子安装在记录室中并用无钙盐水填充。从所需的果蝇遗传杂交中收集游荡的三龄幼虫。
将幼虫转移到盘子中，然后用蒸馏水清洗幼虫三次。将幼虫放入另一个装有750微升冰冷无钙盐水溶液的玻璃解剖皿中。现在将幼虫放在立体显微镜下。
用一把镊子在腹部后部做一个横向切口。用镊子推动下颚，将幼虫翻过来。观察下颌旁边的腹侧神经索。
小心地取出假想的椎间盘和剩余的脑窝组织。接下来，将腹侧神经索与中枢脑和视叶与其他组织分开。将腹侧神经索转移到含有无钙盐水溶液的记录室。
为避免干扰，请用镊子将剩余的神经连接到盖玻片的底部。要对脂肪体进行实验，请继续将脂肪组织与翻出的幼虫分离。将表达品格传感器的孤立脂肪体放在记录室中。
要获取表达传感器的组织图像，请打开显微镜的照明系统。将包含腹侧神经索或脂肪体的记录室放在荧光显微镜的载物台上。要查看 GCaMP6f 荧光，请将激发波长设置为 488 纳米。
对于代谢物，如简洁、热解、ATP 或葡萄糖传感器，将激发设置为 440 纳米。现在定期设置GCaMP6f和代谢物传感器的图像采集。放置浸水物镜，确保其保持浸没状态。
接下来，将记录室连接到灌注系统。使用低通量蠕动泵从腔室中抽出液体，并保持每分钟三毫升的恒定流量。将含有管的溶液放置在显微镜载物台上方25厘米处。
在进行任何刺激之前，通过让记录溶液流动 5 至 10 分钟来获得稳定的荧光基线。现在，用含有葡萄糖、丙酮酸或乳酸的刺激溶液代替流动溶液五分钟。捕获暴露于 80 微摩尔苦霉毒素的受刺激腹侧神经索的图像以评估神经元活动。
神经胶质细胞和运动神经元中的简洁传感器在脉冲开始时以相似的速率对一毫摩尔乳酸做出反应。然而，在五分钟的脉冲期间，运动神经元比基线达到更高的增加。当暴露于五毫摩尔葡萄糖时，葡萄糖传感器的信号在神经胶质细胞和神经元中以类似的速率增加。
然而，在葡萄糖脉冲期间，神经元中的信号比神经胶质细胞中的信号增加得更多。敲除Chaski转运蛋白可减少神经胶质细胞中的乳酸转运。Picrotoxin诱导的神经元活动增加导致运动神经元胞体中ATP水平的短暂下降。
观察到简洁传感器在脂肪体中表达良好。当脂肪体暴露于增加的葡萄糖浓度时，可以看到葡萄糖传感器的荧光增加。乳酸和丙酮酸浓度的增加导致简洁荧光和丙酮酸荧光成比例增加。
