首先，准备透明的肾组织样本。然后打开共聚焦显微镜，首先激活激光功率，然后接合共聚焦控制开关。接下来，启动计算机，启动显微镜并启动共聚焦硬件。
运行自检后，启动共聚焦软件。选择合适的镜头。从立方R试剂中取出样品并将其放入共聚焦皿中。
盖上盖子以防止立方 R 试剂干燥。将样品移动到视场中心并调整焦点，直到样品对焦。对于 3D 重建，在一个方向上调整缩放平面，直到看不到荧光，将此位置定义为顶部。
然后以相反的方向调整缩放平面，直到看不到荧光，将此位置定义为底部。单击对话框右下角的运行按钮以启动扫描。对于大图像重建，将视场定位在样品的中间，并将其确定为中心。
选择二乘二的视场。在ND多功能界面中，选择Z堆栈以重建大图像。根据需要调整面板中的各种选项，然后按运行按钮开始扫描。
用胶水将透明肾脏粘附在样品固定适配器上，然后等待肾脏牢固连接。然后将肾脏浸入样品箱中，并将样品箱滑入显微镜系统。密封舱口。
在定位界面中，将样品调整到适当的观察位置。切换到采集接口，设置光路。选择 488 纳米激光器。
选择 405-488-561-640 的光束滤光片，然后将光分光滤光片块设置为 SBS LP 490。选择相机二并将伪颜色更改为绿色。输入从通道子菜单获得的左 Z 偏移量，然后输入右 Z 偏移量。
选择最小的变焦并对其进行微调以获得光学清晰度。确定整个器官的 XY 边界和 Z 范围。然后将激光强度和曝光时间调制到小于 10 毫秒。
单击“开始实验”以启动该过程。如果组织过大，请使用显微镜软件将两张或多张图像与图像拼接相结合。打开捕获的文件，然后选择“处理”。
然后是方法和拼接，然后是方法参数。单击“应用”以完成图像拼接。使用血管内注射的fitindex链标记肾小球。
在清除的肾脏中，可以通过使用光片显微镜或共聚焦显微镜清楚地观察到肾小球。
