Whole Mount Preparation and Confocal Imaging of the Murine Ocular Lens Anterior Region for Structural, Developmental, and Functional Insights

通过在琼脂糖中创建固定化凹槽来开始该过程。为此，使用微波炉加热并在 PBS 中混合 2%琼脂糖，直到溶液液化。将 250 微升液化琼脂糖移液到玻璃底培养皿中。

然后，使用柔性塑料盖玻片，将琼脂糖压平在培养皿上。琼脂糖冷却并完全凝固后，使用细尖镊子去除盖玻片。然后，使用三毫米活检冲床，在培养皿中心的琼脂糖上开一个孔。

在精细的任务擦拭的帮助下，去除多余的琼脂糖。用PBS水合的琼脂糖霉菌储存在4摄氏度下，直至使用。在安装隔离镜面目镜之前，根据镜片的类型，将两毫升适当的培养基添加到制备的琼脂糖模具中。

使用胚胎镊子，轻轻地将固定或活晶状体转移到琼脂糖中的凹槽中。然后，将培养皿放在倒置的显微镜载物台上。通过可视化细胞核染色，确认晶状体位于面向物镜的前部区域。

如果没有观察到细胞核，则使用弯曲的镊子将晶状体轻轻旋转约 180 度，使前部区域朝向物镜。接下来，继续使用共聚焦显微镜获取图像。对于透镜极头的可视化，使用 40 倍物镜采集 Z 堆叠图像，步长为 0.3 微米。

获取晶状体囊表面之前的第一张图像，通过WGA染色指示，以及上皮细胞顶端表面之后的最后一张图像。要可视化上皮细胞，请使用步长为 0.3 微米的 63 倍物镜采集 Z 堆栈图像。