Routine Passaging of Patient-Derived Gastric Organoids Through Fragmentation

在患者来源的胃类器官准备好包装后，开始常规传递类器官。首先，从每个孔中取出含有类器官的培养基，嵌入基底膜基质中，在24孔板中完成。然后将一毫升冰冷的高级 DMEM F12 培养基直接分配到基底膜基质圆顶上。

继续吸气和分配培养基，直到圆顶的所有碎片从板上脱落。然后将介质和破碎的基底膜基质从孔输送到下一个孔，并对所有计划用于包装的孔重复该过程。拆卸最后一个基底膜基质圆顶后，将培养基和混合物分配到1.5毫升管中。

将 1000 μL 吸头连接到 P1000 移液器，然后将此吸头插入 200 μL 吸头。使用这种移液器装置，用力上下移液类器官基质混合物，大约25次，将类器官碎片化成小块。离心破碎的类器官混合物，使用台式离心机在4摄氏度下在2000G下离心30秒。

将计算出的新鲜基底膜基质的体积加入到管中的沉淀类器官中。轻轻地上下移液管的内容物进行混合。快速等分试样，将 50 μL 类器官基质混合物放入 24 孔板的单个孔中。

立即盖上盘子，以一个平稳的动作，将盘子倒置。将倒置的板置于37摄氏度的组织培养箱中35分钟，使基底膜基质聚合。最后，向每个孔中加入500微升预热的胃类器官培养基。

到启动后第 20 天，类器官已准备好传代，表现为类器官大小较大或内部变暗。类器官超越了这些点，开始分解成2D单层。在包装和重新播种胃后，穹顶包含许多类器官片段，这些片段很快重组成更多的类器官。