将 dsRNA 显微注射到 树枝 状蛹中并监测发育结果

首先，打开玻璃拔针器，然后将热量设置为 280，速度设置为 170，延迟设置为 250，磁极设置为 30。斜切毛细管玻璃针的尖端。然后使用微型注射泵，将约两微升铁蛋白重链同源双链RNA溶液装入注射针中。

将含有Trichogramma dendrolimi蛹的琼脂平板转移到复合显微镜载物台上。小心地将注射针以约30度角插入蛹腹部，并逐渐注入5纳升铁蛋白重链同源双链RNA溶液。每次处理在25摄氏度下孵育约700只蛹24或48小时。

每次重复从 100 个蛹中提取 RNA 内容。每次处理大约50个蛹，观察黄蜂的出现。最后，记录黄蜂出苗率和畸形率。

与双链GFP或未注射的蛹相比，注射双链铁蛋白重链同源性的T.dendolimi蛹的出现率显著降低。在新出现的黄蜂中，51.85%的T.dendolimi黄蜂经受双链铁蛋白重链同源性影响后发育出畸形的小翅。在注射双链GFP或未注射任何注射的黄蜂中不存在这种变形。

此外，注射双链铁蛋白重链同源性的 T.dendrolimi 蛹显示黑色素，表明铁代谢异常。在注射双链GFP的黄蜂或未注射的黄蜂中未观察到黑色素。