用于组蛋白 PTM 定量的小鼠脑免疫富集片段分离

首先将 2.125 毫升等渗密度梯度添加到含有鼠脑匀浆的 15 毫升聚丙烯管中。用传真缓冲液将每个试管加满至最终体积为 8.5 毫升。轻轻倒置试管 20 次以充分混合。

使用窄刻度移液管，轻轻覆盖 4 毫升粉红色、37% 密度梯度，建立两个干净的层。切换移液器，并在 37% 层下方铺上 2 毫升蓝色、密度梯度为 70% 的底层。将试管转移到冷却至 4 摄氏度的离心机中，并以 500 G 的速度旋转 20 分钟，并将制动坡道设置为最低设置。

离心后，使用干净的移液管从15毫升管的顶部丢弃髓磷脂。使用另一个移液管小心地将密度梯度的顶部片段收集到干净的15毫升聚丙烯管中。接下来，通过沿着试管的侧面缓慢地绕着移液器旋转来收集样品中的所有细胞，同时收集免疫富集的片段。

将富含免疫的片段转移到新的 15 毫升聚丙烯管中。通过向试管中加入 10 毫升传真来洗涤样品。轻轻倒置试管 20 次以充分混合。

在冷却的离心机中旋转试管，将制动斜坡设置为最低设置，以沉淀分离的免疫细胞。