小鼠脑组蛋白翻译后修饰的流式细胞术和数据分析

分析抗体组合，确认细胞仪至少有四种激光，包括红色、黄色、蓝色和紫色。使用补偿微球或单染色细胞对照建立补偿基质。为了校准和标准化，在每个实验开始时通过调整光电倍增管电压来运行彩虹荧光珠，直到珠峰与先前实验的目标值对齐。

设置实验的光电倍增管电压和增益。然后使用抗体捕获的补偿珠建立补偿基质。接下来，在点图中绘制对数上的侧向散射面积与线性的前向散射高度，栅极碎片并使用 S1 门选择像元大小，在点图中选择单线态单元，使用 S2 门前向散射宽度与前向散射高度。

要建立四楼闸门，请为每个四楼通道使用相关的 FMO。使用单参数直方图确定每个通道中的正信号并相应地建立门。使用既定的门控策略仔细记录样品。

使用 P2 RY 12 plus 信号鉴定小胶质细胞，并仅确定小胶质细胞相应通道中的蛋白质表达。通过复制记录期间使用的相同门控策略，在流式细胞仪分析软件用户界面上建立分析门。使用添加统计函数在补偿通道高度上选择感兴趣总体的中位数。

使用表格编辑器将相应渠道的 MFI 值导出到电子表格中，以便进行进一步的统计分析。脂多糖处理诱导组蛋白三赖氨酸27乙酰化增加。当 MFI 在性别内归一化时，染色细胞的直方图分析显示正态分布的细胞群，细胞移位至荧光增加。

在染色的细胞中观察到组蛋白三赖氨酸 27 乙酰化的类似增加。