Western Blot Analyses of FAM83A Knocked Down Human Cervical Cancer Cells

用冰冷的PBS洗涤上述处理过的细胞以除去任何残留的培养基，并加入50微升含有PMSF的RIPA裂解缓冲液以裂解细胞。将细胞收集在试管中。将细胞在冰上孵育几分钟以确保完全裂解，然后在12,000g的4摄氏度下离心15分钟。

然后将细胞裂解物与上样缓冲液混合，并在水浴中以 95 至 100 摄氏度加热混合物 5 至 10 分钟以使蛋白质变性。将每个样品中的 10 μL 总蛋白上样到 SDS0-PAGE 凝胶上。在80伏的恒定电压下运行凝胶。

当溴酚蓝到达分离凝胶底部时停止电泳。然后在冰浴中使用湿式转移系统将分离的蛋白质从凝胶转移到聚偏二氟乙烯膜上。转移完成后，取出膜并将膜在室温下在封闭缓冲液中孵育约一小时。

将膜与与HRP偶联的二抗一起孵育。使用化学发光底物可视化膜上的蛋白质条带，并使用化学发光成像系统捕获信号。Western blot分析显示，FAM83A的抑制表达增加了Bax和cleaved-caspase-3蛋白，降低了BCL-2的表达，并增加了细胞色素c的释放。