小鼠冷冻损伤诱导后的口面部肌肉组织采集

通过为每个样品创建圆柱形锡箔来准备嵌入模具。用最佳切割温度或 OCT 化合物填充模具。然后准备两个保温桶。

在小桶中加入异戊烷，在大桶中加入液氮。在肌肉解剖前 10 分钟将小桶放入大桶内。首先准备小鼠进行解剖。

切开老鼠脸上的皮肤，露出咬肌。切除腮腺，使咬肌的后部完全暴露。将咬肌从其前附着物解剖到下颌骨上的后附着物。

然后将肌肉组织浸没在 OCT 中，使其垂直于化合物。使用针架将模具转移到预冷的异戊烷中。等待 40 秒，直到 OCT 变为白色和纯色。

将新鲜冷冻肌肉样品储存在标记的 24 孔板中。立即在 20 摄氏度下切片样品，或将其储存在 80 摄氏度下以供长期使用。接下来，切开从脚踝到膝盖的皮肤，切开筋膜，露出胫骨前肌。

使用显微解剖钳的尖端分离胫骨前肌腱，并将其向上滑动到膝盖，以切断附着在胫骨上的纤维。切断脚踝处的肌腱。HE和天狼红染色显示，冷冻损伤后，胫骨前肌在14 d后完全再生，形态与完整对照相似。

相比之下，咬肌在冻伤 14 天后表现出肌纤维再生受损和细胞外基质沉积过多。损伤 14 天后对 Pax7 的免疫组织学染色显示细胞核密集，但肌肉卫星细胞没有成比例增加。损伤后 14 天，在胫骨前肌中检测到大量位于中央的肌纤维，而在损伤区域的咬肌中，肌纤维的轮廓几乎不明显。

相反，观察到 PDGFRα 阳性 FAP 的浸润。