首先，使用多通道移液器将 100 微升 10 毫摩尔半胱氨酸移液到无菌罩中 96 孔板的孔中。孵育板后，小心地从孔中吸出溶液，避免刮伤电极。用无菌去离子水冲洗孔两次。
接下来，在每个孔中加入 100 微升新鲜制备的鼠尾胶原蛋白 1 溶液。将板在弱光下孵育 1 小时，然后用去离子水洗涤两次。接下来，将收获的脑内皮细胞转移到新鲜的无菌槽中。
使用多通道移液器，向每个孔中加入 100 微升细胞悬液，在 30 秒内完成接种，保留一个孔培养基仅用于数学建模目的。在 96 孔板适配器上，将每侧的红色夹子向外移动，以便插入板。精确地将板的 A one 孔与适配器的 A one 区域对齐，并在板的顶部轻轻按压以将其牢固地固定到位。
然后重新锁定红色剪辑。关闭培养箱后，按设置启动仪器，所有正确检测到的孔将在板图上以绿色表示。按下检查按钮以验证绝对阻抗读数。
现在，使用板图下方的下拉菜单选择用于实验的板类型。选择 multi-frequency 以测量各种交流电频率下的阻抗。最后，单击开始按钮开始实验。
让细胞增殖，直到形成高电阻单层，由欧姆增加表示。在准备处理溶液之前，请确保细胞生长已达到平台期。要制备处理溶液，请将标记的 1.1 毫升聚丙烯簇管放入条状管板中。
按照预制的板图，将 3 个 50 μL 的处理细胞因子或细胞加入试管中。然后将它们放入培养箱中加热。在 EIS 软件上。
单击 pause 可暂时停止正在进行的实验。出现提示时，打开培养箱并小心地松开两个红色夹子，同时保持板稳定。在实验仍处于暂停状态的情况下，将板转移到无菌罩中。
然后从培养箱中取出处理剥离的试管。使用多通道移液器。小心地重悬处理剥离管的内容物。
现在从剥离的试管中吸出 100 微升处理液，并将其转移到 96 孔板上的适当孔中，仅将完全培养基添加到无细胞孔中。尽量在 5 分钟内完成移液，因为板的过度冷却可能会影响内皮细胞单层的阻力。将处理过的板重新安装到机器上，然后检查以评估电极孔阻抗。
确认已选择正确的多频采集设置和板目录。然后按 resume 继续实验。实验进展到所需的终端节点后，按 finish 自动保存录制的文件。
导航到文件，然后单击 export data 将数据导出为 XLS 或 CSV 文件以供进一步分析。在 30 小时内观察到耐药性增加，表明内皮细胞的生长期。在生长期，细胞在 48 小时时稳定在不同水平，测量标准化允许更可靠地解释抗性变化。
治疗前脑内皮细胞的细胞计数不正确导致生长期波动，逐渐下降为稳定的抵抗平台期。优化的细胞接种密度和负载体积可实现最佳生长期。细胞因子似乎对屏障有瞬时作用。
黑色素瘤细胞的添加大大降低了屏障阻力。细胞旁屏障和基底外侧成分随着细胞因子的添加而波动，黑色素瘤细胞的添加导致细胞旁屏障相对于基底外侧成分的减少幅度更大。
