首先,在无菌罩中,将高压灭菌器 24 孔罐拧入乙醇灭菌的细胞模块中。向每个锅中加入 900 微升基础培养基。现在,将高压釜浸渍电极磁性连接到电池模块盖上。
然后盖上孔盖,使浸渍电极适合底部电极罐。接下来,将细胞模块连接到培养箱中的适配器上。然后启动软件,然后单击布局选项卡以加载和注释实验板图。
使用无菌的 24 孔培养板固定膜插入物。在需要涂层的地方,将细胞外基质溶液添加到孔的交叉处 用单通道移液器,小心地将脑内皮细胞接种到每个孔插入物的顶端腔中。要创建无细胞孔,仅将完全培养基移液到其中一个插件中。
然后将细胞模块从培养箱转移到无菌罩中。使用镊子小心地将准备好的插件转移到电极罐中。将细胞模块放回适配器上方的培养箱中。
然后在实验控制选项卡中找到频谱部分,并选择从 1 赫兹开始,并在 100 kHz 处停止,以在整个频率范围内采集数据。接下来,在等待时间下,选择 15 分钟以允许以最快的速率进行连续测量。按 start 启动数据收集。
大约 48 小时后,一旦达到内皮抗性平台期,将准备好的处理剂放入培养箱中以保持最佳温度。在选定的治疗时间取下电解池模块,该时间在 15 分钟测量后立即开始。在无菌罩中,打开细胞模块。
然后小心地将 70 微升处理液移液到相应插入物的顶腔中。在下一次测量开始之前,立即将电池模块放回适配器。要结束实验,请按停止按钮,然后单击文件,然后单击导出,将数据直接导出为 XLS 文件,并为其命名。
虽然在重复孔之间观察到一些差异,但数据归一化减少了这种变化,并允许更好地比较处理与对照。当添加细胞因子时,观察到跨内皮电阻的瞬时降低。黑色素瘤细胞系在 5 小时内导致耐药性显着降低。