首先，为外科手术准备麻醉的小鼠。使用手术剪刀，沿着头部剃光区域的中心切开皮肤，露出头骨。然后，用稀释的过氧化氢的无菌棉签清洁头骨一到三秒钟，然后用新的无菌棉签擦干头骨。
为了使颅骨前后对齐，测量前囂和λ处的背腹深度。以bgma为起点，在皮层上定位并标记所需的区域。然后，使用环钻钻头和牙钻暴露皮质。
确保钻头的角度垂直于颅骨的曲率，以实现均匀的开颅手术并防止损坏。钻孔直到感觉到阻力减小，然后停止钻孔过程。使用 23 号针尖，小心地去除脱落的骨头碎片。
现在，用浸泡在冷 ACSF 中的手术泡沫清洁暴露的皮质，以清除任何碎屑并止血。做一个切口，以方便微棱镜插入并减轻皮层的压力。将手术刀连接到立体定位臂上的支架上并定向刀片，或立体定位臂沿内侧轴切割。
现在，将刀移动到所需的前后坐标。然后，将刀移动到开颅手术的内侧边缘，然后慢慢放下，直到它接触到骨头。使用给定的方程式确定颅骨表面预切切口的深度。
确保切口长度大于一毫米。理想情况下，它应该在 1.2 毫米左右。将刀从开颅手术的内侧边缘移动到切口的起始内侧坐标，然后慢慢将刀放入皮质。
刺穿硬脑膜并进入皮质后，滴一滴冷ACSF以保持组织润滑和水分。达到最终深度后，沿内侧侧轴移动刀。如果用刀拖拽纸巾，请上下移动刀几次以确保纸巾被切割。
然后，继续横向移动，同时将刀返回到最终深度。完成后，慢慢举起刀。如果出现血液，请用浸有 ACSF 的手术泡沫清洁切口部位，以稀释并去除血液。
将饱和泡沫放在暴露的皮层上，直到准备好插入微棱镜。将微棱镜连接到植入套件上。确保棱镜的成像侧与底板螺钉相对。
将微棱镜连接到立体定位框架上，并将其定向到与切口对齐。慢慢地将微棱镜降低到切口部位。最初取下 ACSF，但一旦棱镜进入皮层，就用冷 ACSF 冲洗它。
如果需要，添加额外的 ACSF 并通过上下移动棱镜来搅动皮层。用硅胶保护层覆盖暴露的皮质区域和晶状体，以尽量减少周围颅骨和假人镜上的多余粘合剂。现在，将头板向后放置，以便在水泥应用中正确放置植入物。
将头板的中线稍微向建议的开颅手术的右侧对齐，以确保在头部固定实验期间可以固定两侧。然后，将一勺不透明水泥粉与四滴混合介质和一滴催化剂混合，制备粘性牙水泥。将水泥涂在头板和头骨上，并将头板固定到位，直到水泥固化。
涂上粘性水泥覆盖暴露的头骨和组织，加入微棱镜和头板直至稳定。向上移动立体定位臂，同时用镊子稳定微棱镜以分离假显微镜。将保护盖放在镜头上并通过拧紧螺丝将其固定。
在黑暗中探索开放竞技场的动物的神经元在相隔三周的会话中显示出相当水平的荧光和放电率。
