使用 LC-TIMS-TOF MS/MS 筛选具有稳定同位素标记的脂质的质谱仪的校准

要开始质谱仪或 LC-TIMS-TOF-MS/MS 的 MS 校准，请打开 TIMS 控制软件，然后在校准子选项卡下，单击 m/z，从 Dropbox 中选择调谐混合物，然后单击右下角的校准。继续单击 calibrate（校准），直到达到 100% 的分数。现在选择移动性选项卡，并按照演示的相同步骤进行操作，直到达到 100% 校准分数。

为了生成校准曲线中的每个校准点，请在脂质内标混合物中加入 10 μL 氘代内标混合物。为所需范围内的 7 个校准点准备 7 个这样的加标样品。使用数据分析软件，根据被动 MS/MS 模式手动注释脂肪酸链。

要确定稳定同位素标记或 SIL 效率，请计算含 SIL 同位素的面积与不含 SIL 的同位素的面积之比。通过确定在任何位点找到标记原子的概率来计算理论模式。通过将实验同位素谱与数据分析软件上模拟的理论模式拟合来计算 SIL 富集。

要开始运行，请单击温度计按钮激活柱温箱，然后单击阀门按钮激活泵。将 MS 方法设置为之前保存的相应方法。确认进样体积为 5 μL，将一个目标样品瓶的样品瓶排成 20 比 1，然后保存样品列表。

启动序列，并通过系统上显示的消息 injected 确认注射成功。复制第 1 行，并将其粘贴到下面以生成新的第 2 行。根据实验，用样品填充第 2 行。

确保在自动进样器中使用正确的位置。如果流动相是新鲜的，则首先使用制造商提供的脂质混合物标准品进行峰形测试，以将其与以前的结果进行比较。脂质混合物和标准品显示在屏幕上。

确保新行具有正确的分离方法，而不是行 1 中使用的预处理方法。确保输入的 MS 方法正确无误。检查是否加载了正确的处理方法，并启用了运行自动化流程。

保存样品列表以确保在当前运行完成后分析样品。