首先，在实验浴室上安装一个干净的玻璃载玻片。在载玻片上涂上两到三微升层粘连蛋白，让它干燥 30 秒。然后，将大约 400 微升的肌纤维悬浮液倒在载玻片上，让纤维粘附在层粘连蛋白上 10 到 15 分钟。
将实验室放在配备落射荧光的倒置显微镜的载物台上。为了验证纤维的活力，在实验室的两侧放置两个铂电极。在施加矩形电流脉冲 0.8 至 1.2 毫秒后，观察极端肌纤维收缩。
在Tyrode溶液中用3.5至4.5微摩尔的快速钙染料Mag-Fluo-4 AM加载纤维4至5分钟。用Tyrode溶液洗涤载玻片后，让细胞内染料在黑暗中脱酯15至20分钟。在昏暗照明下采集钙瞬变时，使用油浸式 40X 物镜和连接到数字化仪的光电倍增管收集并保存光信号。
在采集软件中，确保比例为 0 到 200 个任意单位。然后，调整激发点的大小和光电倍增管的增益，将静息荧光或 F 静息设置为 10 个任意单位。为了分析录音，请将整个迹线的低通滤波器设置为一千赫兹。
然后，调整峰值以计算迹线一秒内的 F 静止值。将 F 静止调整为零并测量峰值肌浆钙瞬时振幅。测量振幅的 10% 到 90% 的上升时间、半最大值的持续时间以及振幅的 90% 到 10% 的衰减时间。
然后，根据与双指数函数的拟合来估计衰减动力学。计算微摩尔中的峰值钙浓度。最后，保存衰减 tau 1 和 tau 2 的时间常数值，以及振幅 A1 和 A2。FDB 和 EDL 肌肉显示出称为形态学 II 型的钙动力学，比目鱼肌表现出形态学 I 型钙瞬变。
来自 PDQA、PL 和 EHL 肌肉的纤维具有 II 型形态。钙瞬时PDQA、PL和EHL的动力学信号与FDB EDL肌肉的信号相似，但与比目鱼肌信号不同。
