首先,将 20 毫升发酵葡萄样品转移到无菌的 50 毫升螺旋盖管中。然后在试管中加入10毫升冷水,涡旋匀浆。将样品在800G下在4摄氏度下离心一分钟。
将上清液转移到新的50毫升管中,并在4摄氏度下以3000G离心20分钟。弃去上清液后,将沉淀重悬于一毫升PBS中。将细胞悬液转移到2毫升螺旋盖管中,并以14,000G离心两分钟。
现在将沉淀重悬于pH 7.4的978微升磷酸钠缓冲液和122微升DNA缓冲液中。涡旋管并将其置于 4 摄氏度 45 分钟至一小时。将一毫升样品转移到一管裂解液中并拧紧盖子。
在打珠研磨机中将样品均质化三次,每次 60 秒。然后将裂解基质E管在16,800G下离心一分钟,将上沉转移到干净的微管中,并向管中加入250μL蛋白质沉淀溶液。摇晃试管 10 次以混合内容物。
将样品以16,800G离心五分钟,并将上清液转移到无菌的15毫升管中。然后向上清液中加入一毫升结合基质悬浮液,并通过倒置试管两分钟进行混合,然后将它们放入架子上三分钟。除去一毫升上清液后,将基质重悬于剩余的上清液中。
将 600 微升混合物转移到离心过滤管和离心机中。然后倾析流过的液体,并将 500 微升洗涤液加入离心过滤管中。取下旋转过滤器并将其放入新鲜的集水管中五分钟。
干燥后,在滤膜上加入50微升不含DNAse的温水,并用移液管吸头轻轻搅拌基质。以14,500G离心一分钟以洗脱DNA。将样品加载到琼脂糖凝胶上。
最后,测量DNA浓度。