首先，将滤纸切成大约 17 x 20 毫米的矩形并去除四个角。然后，在滤纸中创建大约 7 x 10 毫米的空心中心。将市售环连接到柔性薄膜层上，并在柔性薄膜层中形成一个空心中心。
将准备好的环放入 35 毫米培养皿中。预培养后，从孵化器中取出鸡蛋，并将其放在鸡蛋纸盒托盘上的长轴上。用 70% 乙醇清洁蛋壳的整个表面，静置 15 分钟。
将鸡蛋放在短轴上，然后在底部打碎。在干净的 100 毫米培养皿上打开鸡蛋以提取其内容物。使用移液管，将大约 10 毫升稀白蛋白转移到 15 毫升管中进行卵外培养。
用稀白蛋白填充培养皿的中心孔。用薄纸轻轻去除附着在胚胎卵黄膜上的厚白蛋白。现在，小心地将滤纸贴在卵黄膜上，确保胚胎的身体轴与滤纸上的中心矩形对齐。
用剪刀剪开滤纸周围的膜。使用镊子，向倾斜方向轻轻将隔离的滤纸从轭上拉开。将滤纸倒置，使胚胎背侧朝下。
小心地将整个滤纸从长轴的一侧浸入含有洗涤介质的 100 毫米培养皿中。使用干净的移液管，轻轻喷洒与滤纸平行的洗涤介质，以去除任何残留的蛋黄。接下来，小心地从洗涤介质中取出滤纸，并用薄纸从胚胎边缘吸收任何多余的培养基。
将装有胚胎的滤纸放在培养皿上，确保胚胎的背面朝下。将培养皿转移到舞台培养箱中进行卵外培养。用温洗介质填充培养皿。
当胚胎达到所需的发育阶段时，将带有胚胎的滤纸转移到装有洗涤介质的培养皿中。将培养皿放入布里渊显微镜的载物台培养箱中。对于校准过程，测量水的布里渊信号。
然后，测量甲醇的布里渊信号。在使用四倍物镜的明场成像下，将激光照明点调整到第二对体节。然后，切换到40倍物镜，并将激光点微调到神经管的中间。
解除激光束并调整焦平面。使用二维翻译阶段扫描胚胎并获取感兴趣区域的布里渊图像。完成扫描后，小心地取下带有胚胎的滤纸。
用薄纸从胚胎中吸收多余的洗涤介质。将胚胎放回装有稀白蛋白的培养皿中，进行连续培养。对于布里渊图像重建，加载水和甲醇信号数据。
单击设置区域，然后选择带有四个点的区域来计算校准参数。保存校准结果。加载胚胎扫描数据，点击开始进行参数处理。
最后，基于所有像素的布里渊位移重建二维布里渊图像。神经板的估计纵向模量与体节数量和孵育时间的布里渊位移显示，在神经管闭合期间，组织的布里渊位移增加。
