农杆菌介导的 甘蓝型油菜 毛根转化DH12075

首先，将芸苔型油菜的种子DH12075放入微管中。要对种子进行脱脂，请在微管中加入水和 0.1% 洗涤剂，摇匀 60 秒。现在用水冲洗种子，然后用 70% 乙醇冲洗，每次 60 秒。

接下来，将种子放入 10% 次氯酸钠溶液中，摇匀 20 分钟。去除漂白剂后，用无菌水清洗种子四次，每次 60 秒。将种子放在含有种子萌发培养基的培养皿上。

将种子在四摄氏度下冷分层过夜，然后将培养皿移至培养室。五天后，将幼苗转移到装有植物生长培养基的植物培养箱中。在 5 毫升 LB 培养基中接种携带毛茸茸的根诱导质粒 PRIA 4B 的 Ti less 农杆菌 C58C1。

在 28 摄氏度下培养培养物过夜，直到达到 600 纳米的 0.9 比 1 的光密度。将细菌接种物转移到注射器中。使用安装在注射器上的26号针头，在生长培养基上方约1厘米处刺穿18天龄幼苗的下胚轴。

将大约 50 微升的接种物注射到伤口中，并划伤下胚轴表面的组织。将植物放回 21 摄氏度的栽培室两到四个星期。接下来，从下胚轴上切掉带有毛茸茸的根的老茧。

将带有毛根的愈伤组织放在含有毛根生长培养基和抗生素的培养皿上，以抑制农杆菌的生长。在24摄氏度下孵育之前，用透气胶带密封培养皿。孵育后，将毛根从愈伤组织中分离出来，并将单个根转移到毛根生长培养基中。

或者，要生成由野生型芽和转基因毛根组成的复合植物，请去除植物的原生根。然后将具有新生毛根的植物转移到含有植物生长培养基和抗生素的培养箱中，以抑制农杆菌的生长。