拟南芥 Col-0的毛根转化与再生

首先，将表面灭菌的拟南芥Col-0种子放在含有种子萌发培养基的平板上。经过两天的冷分层后，将培养板移至温度为21摄氏度的培养室中，白天光周期长，湿度为50%。将一周大的幼苗转移到装有植物生长培养基的植物培养箱中。

在LB培养基中培养根癌农杆菌培养物，直到其达到600纳米的光密度为0.9比1。使用安装在胰岛素注射器上的针头，在一个月大的拟南芥小植株的初级花序茎的基部注射约50微升细菌培养物。用注射器刮擦主茎表面的组织。

两到四个星期后，切除出现的毛根，并在培养皿上用毛根生长培养基培养，并辅以抗生素以抑制农杆菌生长。在黑暗中以 24 摄氏度培养毛根。一到两周后，用毛根生长培养基将培养皿上的毛根个体化，并每四到五周将选定的毛根系转移到新鲜培养基中。

将毛茸茸的根转移到具有再生培养基的平板上以诱导愈伤组织形成，并在21摄氏度的长日光周期中培养。一旦枝条从愈伤组织中长出，将枝条剪下并将它们转移到枝条伸长培养基中两到三周，以促进生长和伸长。然后将细长的枝条转移到根部诱导培养基中。

最后，将生根植物转移到土壤中进行转基因选择。在拟南芥中，所有测试的毛根系在14天内诱导了黄色愈伤组织。第一枝原基，可见为深绿色斑点，在转移到再生培养基后三周内出现。

四周后，枝条覆盖了90%的毛根，有些情况显示不定根形成。然而，即使在三个月后，一条线也没有再生。与野生型相比，拟南芥的毛根再生体表现出矮化表型，根系密集，叶子起皱，开花时间改变。