人中性粒细胞染色和用于活细胞分析的中性粒细胞检测板的制备

从人外周血中分离中性粒细胞后，将它们重悬于1.5毫升离心管中的RPMI 1640培养基中。将 1 微升膜渗透性红色 DNA 模具加入 1.5 毫升中性粒细胞悬浮液中，并在黑暗中孵育 5 分钟。在室温下以2,500g离心中性粒细胞悬浮液5分钟。

离心后，取出含有沉淀中性粒细胞的试管并吸出上清液。将中性粒细胞重悬于一毫升RPMI中，然后再次离心。最后一次洗涤后，将中性粒细胞重悬于一毫升RPMI中。

向血细胞计数器中加入少量中性粒细胞悬浮液，并在显微镜下计数。使用RPMI将中性粒细胞悬浮液稀释至每毫升10至5中性粒细胞的1.5倍。将 4 微升 1 至 100 种预稀释的膜不渗透绿色 DNA 染料加入 1 毫升中性粒细胞悬浮液中。

每孔将 100 μL 中性粒细胞悬浮液分配到经过透明组织培养处理的 96 孔板中。将 100 μL 含有刺激试剂的 RPMI 加入到相应的孔中，无论是否含抑制剂。将板置于装在5%二氧化碳培养箱中的活细胞分析系统中。