首先，启动活细胞分析系统软件。按屏幕左上角的加号启动添加容器。选择“按计划扫描”，然后选择“新建”以运行扫描程序。
选择“标准”。然后，将扫描设置设置为“无”（None），将图像通道设置为“相位”（Phase）、“绿色”（Green）和“红色”（Red），并分别进行采集时间。将目标设置为 20 倍。
从列表中选择孔板，然后选择容器位置，将孔板放在成像系统的托盘上。选择包含样品的孔，并确定每个孔要捕获的图像数量。此信息会自动生成板的估计扫描持续时间。
单击“创建板图”（Create Plate Map） 输入每个孔的信息，例如细胞类型和化合物。然后命名研究。在下一个屏幕上，选择“基本分析器”作为分析类型，然后从下拉列表中选择“分析定义”，该列表显示以前使用的分析定义。
将绿色和红色的光谱解混保持在 0.0。将扫描安排为每 15 到 20 分钟进行一次，持续 8 小时。拖动屏幕顶部的白色和灰色条以设置扫描的开始时间。
在下一个屏幕上，查看扫描设置，然后按“添加到计划”开始扫描。扫描完成后，在“视图”选项卡上，打开容器进行分析。按屏幕左侧的启动分析，然后选择创建新的分析定义。
选择“基本分析器”并使用相位、绿色、红色和重叠图像通道。选择 6 到 8 个具有代表性的示例图像进行训练。要配置分析定义，请将绿色对象设置为形成中性粒细胞胞外陷阱或 NET 的中性粒细胞，将红色对象设置为所有中性粒细胞的细胞核。
按“预览当前”或“全部预览”，然后调整每个参数以优化结果。选择用于分析的扫描时间和孔。然后为分析定义提供标签。
查看摘要并启动分析。分析完成后，双击分析定义的名称以打开分析的算例。打开屏幕左侧的图层，检查每个单元格是否正确标记。
单击屏幕左侧的“图形指标”，然后选择“每张图像的计数”作为绿色计数。选择要导出的时间点和孔。对于选择分组，选择“板图复制”以确认在扫描过程中正确指定了所有孔，然后单击“导出数据”。
同样，导出红色计数和重叠计数的数据。使用给定的公式，计算每个条件和时间点形成细胞的 NET 的百分比。通过绘制每个时间点形成NET的中性粒细胞的百分比来可视化NET形成的时间过程。
添加AKT抑制剂可阻断PMA或钙离子载体刺激的中性粒细胞的NET形成。使用这种方法可以以高通量方式测试靶向NET形成的潜在分子。
