创建CLEM导航图和制备电子显微镜的超薄切片

首先，取表达mScarlet的小鼠脑组织的超薄切片。将 10 微升的安装缓冲液添加到盖玻片的超薄部分上，然后将新的干净盖玻片放在安装缓冲液上。将两个带有超薄截面的盖玻片放入成像室中。

在倒置荧光显微镜的明场成像模式下使用环形标记物定位切片，然后移动到切片的一角。打开白光并捕获明场图像。然后关闭白灯。

激活激光并捕获相同视场的荧光图像。停用激光并移动到重叠率为 10% 的相邻视场。同时捕获第二个视场的明场和荧光图像，并记录将视场拼接在一起的成像路径。

现在使用导航地图来定位感兴趣的单元格。激活激光并捕获感兴趣细胞的 300 帧荧光图像。然后，停用激光。

之后，激活白光并拍摄大约 100 张连续明场图像。要准备用于电子显微镜的切片，请用双蒸水填充玻璃罐。从成像室中取下固定超薄切片的盖玻片，并用镊子将它们分开。

用截面夹住盖板玻璃。用双蒸水洗掉安装缓冲液并使其干燥。使用单面刀片在超薄部分周围划出哈希值。

在分数的每个角落滴入 10 微升 12% 氢氟酸。慢慢地将盖玻片放入水中。然后将Pioloform薄膜和超薄切片漂浮在水面上。

在截面上放置一个未涂层的槽网格，以将其捕获在网格中心。用paraform覆盖载玻片。用Pioloform薄膜拿起网格，并在室温下风干。