从转染荧光团偶联的 EV-miRNA 的 Calu6 细胞中分离的 EV 中 EV 中细胞 miRNA 和 EV-miRNA 信号的流式细胞术分析

首先，取从 Calu6 细胞中分离的 EV，转染荧光团偶联的 EV-micro RNA 和细胞 micro RNA。在适当体积的超滤PBS中稀释EV，以制备用于流式细胞术分析的细胞外囊泡悬液。使用纳米流式细胞仪分析纳米级颗粒。

启动软件并根据推荐的校准说明配置仪器。使用性能纳米珠，进行性能测试。如果在标准尺寸范围内检测到纳米微珠，则该仪器的性能被认为是最佳的。

确定适合 EV 颗粒检测的流速。现在，使用超纯过滤水进行质量控制检查，以验证仪器的流体并评估探测器和激光器的性能。根据制造商的方案配置参数以评估微球混合物中不同群体的灵敏度和分辨率。

然后，应用适当的门控以区分磁珠群和仪器噪声。接下来，在加载样品进行分析之前，对样品进行彻底涡旋，以确保 EV 均匀分布。启动流式细胞术数据分析软件，引入超滤PBS。

使用超滤 PBS，为 EV 颗粒设置门控，确保门控与基于校准的适当粒径相对应。将已转移和涡旋的 EV 放入协调兼容的管中，然后将管子装入仪器。捕获 EV 信号，同时在 x 轴上绘制 FSC，在 y 轴上绘制 SSC。

对于 x 轴上的细胞 micro RNA 检测，选择荧光信号 1，对于 y 轴上的 EV micro RNA 检测，选择荧光信号 2。使用从转染单个微量RNA的细胞中分离的EV样品。建立了荧光团的补偿参数。

流式细胞术显示 miR-451a、Alexa fluor-488 在支持高效封装和释放的 EV 中瞬态积累。相比之下，在EV中未观察到细胞miR-67的荧光。