首先,将选定的酵母转化体在30摄氏度的三毫升SD URA培养基中生长,直到达到饱和。测量培养物在600纳米处的光密度。在室温下以14,000G离心两毫升过夜培养物。
移出上清液。将沉淀重悬于一毫升MES缓冲液中。在室温下以14,000G离心混合物。
然后,除去上清液。再次用MES缓冲液洗涤细胞后,将细胞重悬于两毫升MES缓冲液中。然后,将整个体积倒入试剂储液槽中。
接下来,设置酶标仪。导航到管理协议图标,然后将测量类型设置为荧光强度,将读取模式设置为光谱扫描。将微孔板名称输入GREINER 96 F BOTTOM并设置底部光学元件。
通过选择设置扫描超过发射来访问光学设置。将激发波长调整为 433 纳米,激发带宽为 10 纳米。将发射波长范围设置为 460 纳米至 550 纳米,发射带宽为 10 纳米,步长为 1 纳米。
将设置时间设置为 0.1 秒。现在,在96孔透明底部黑板的孔中制备不同浓度的氯化钠溶液。将150微升MES缓冲液加载到A行的前三个孔中,然后,从左到右依次移取150微升相应的渗透石溶液。
使用 12 通道微量移液器,多次移液洗涤的酵母悬浮液。然后,将 50 μL 细胞悬液转移到每个孔中。多次移液每个孔的内容物,以确保均匀混合。
立即测量荧光强度发射光谱。观察屏幕上显示的荧光发射光谱。IDR构建体显示了mCerulean3和黄水晶发射光谱的组合。
对于AtLEA45,高渗应激导致受体的荧光强度增加,而供体的荧光强度降低。这在白蛋白构建体中未观察到。