生成 Kymograph 并测量活秀 丽隐杆 线虫中的单个运输事件

首先，在活秀丽隐杆线虫中记录 DA9 轴突突触区内源性 GFP Rab3 的延时摄影。将延时摄影数据文件导入 Fiji。然后在图像采集过程中检查动物或轴突节段的运动或轻微漂移。

将 StackReg 插件与刚体变换选项一起使用，以校正任何移动或漂移。使用分段线工具并调整线宽以匹配轴突直径。在分割线图标上双击鼠标左键，沿轴突段画一条线进行分析。

现在使用 Fiji 插件 KymoResliceWide，生成 kymograph，在其参数设置中设置沿线宽的最大强度值。使用 straight line （直线） 工具，在 kymograph 中跟踪传输事件。跟踪单个传输事件并将每条线路保存到 ROI 管理器。

在斐济，选择测量参数，例如面积、边界矩形、平均灰度值和 Feret 直径。然后将结果表粘贴到电子表格中进行计算。将宽度乘以相机的分辨率，得到以微米为单位的运行长度。

要确定移动事件的持续时间，请将高度乘以连续时间点之间的采集时间。将暂停时间计算为速度为零的两个连续运动之间的跑步持续时间。将总事件标准化为每分钟事件数和轴突长度段的运动记录仪的总长度。

使用 Ferret angle （雪貂角） 工具，将事件分类为顺行和逆行传输。对于通过绘制从近端到远端的分段线生成的运动图，请使用 Feret 角来确定每个事件的方向性。