首先,将人胰腺组织置于立体显微镜下的基线缓冲液中。使用镊子和剪刀轻轻去除结缔组织、纤维化组织和脂肪组织。用剪刀将组织切成多块,面积约为 0.5 立方厘米。
然后将碎片吸干在薄纸上。现在将四块转移到 35 毫米的培养皿中。用 3.8% 琼脂糖溶液填充培养皿,直到所有碎片完全浸没。
琼脂糖溶液凝固后,切下组织碎片。将手术刀沿着培养皿的边缘运行以去除琼脂糖,并小心地分离组织块。要切片组织块,请将组织块粘在振动切片机的金属板上。
将板安装到仪器的托盘上。然后用基线缓冲液填充托盘。将振动切片机设置为 120 微米的自动切片,并调整开始和结束位置。
现在,将刀片移至组织上方。开始以振幅为 0.8 毫米的慢速切片。使用小刷子将切片收集在含有抑肽酶的基线缓冲液中一小时。
将切片以慢速放在轨道振荡器上,以冲洗掉切片过程中释放的酶。为了测试组织活力,将单个组织切片转移到装有 990 微升基线缓冲液的 12 孔板的孔中。接下来将荧光素二乙酸酯移液管入孔中。
将 10 微升碘化丙啶稀释在 990 微升 PBS 中添加到组织切片中。然后将切片浸入PBS中,在另一个孔中一分钟。最后,将切片安装在带有盖玻片的载玻片上以进行成像。
在新鲜切片的胰腺组织中观察到 80% 至 90% 的活力。由于细胞损伤,在切割表面观察到活性降低。延迟切片导致活力降低。