鸡胚绒毛膜尿囊膜中的人脑类器官移植用于神经血管建模

首先从H9胚胎干细胞中获取大脑类器官，并获得新受精的鸡蛋。第一天，用 70% 乙醇清洁蛋壳表面并使其干燥。将手术纸粘性绷带放在鸡蛋上。

用一盏灯，去掉上端最薄的蛋壳表面。然后用无菌针头轻轻刺穿蛋壳，在不干扰小鸡凸轮的情况下形成气室孔。为了保护胚胎免受外部环境的影响，用新的绷带覆盖气室孔，并在38摄氏度下孵育卵子。

第七天，取下绷带，用70%乙醇擦拭蛋壳表面。然后用新的、更大的绷带覆盖延长线。轻轻刺穿蛋壳，将孔扩大为直径为两厘米的嫁接窗口。

用镊子取下蛋壳窗的边缘，撕下绷带，去除剩余的灰尘和蛋壳碎片。使用无菌宽规格尖端，将类器官收集在50微升PBS中，并小心地将其转移到与胚胎位置相反的凸轮上。在类器官周围加入一滴 7 微升的火柴凝胶。

用封口膜密封窗户，并用绷带将其固定在外壳上。孵育移植物以进行凸轮分化。五天后，取下绷带。

使用剪刀和细镊子，扩大窗口以方便样品采集。用 4% 多聚甲醛固定两分钟，并收集含有类器官的凸轮的 1.5 平方厘米部分。为了确认移植成功，用类器官对 20 微米厚的凸轮组织切片进行苏木精和伊红染色。

移植物组织的苏木精和伊红染色表明类器官在凸轮血管旁边继续成熟，没有任何血管浸润的证据。