首先,将安乐死的小鼠放在手术平台上并打开胸腔。使用手术剪刀,在肋骨下方做一个横向切口,然后切开小鼠两侧到锁骨的肋骨。然后切开横膈膜以释放胸壁,并用镊子提起肋骨以暴露胸腔。
用镊子握住胸腺,轻轻切开将胸腺固定到位的结缔组织。为了进行小鼠胸腺组织的酶解离,将清洁的胸腺放入15毫升的管帽中,并使用无菌手术剪刀将组织细碎。向试管中加入两毫升小鼠解离混合物。
连接包含胸腺片的盖子,并将管子倒置五次以重新悬浮组织。用石蜡膜包裹管帽。孵育后,将试管放在架子上,让组织沉降。
取出上清液,通过70微米细胞过滤器将其放入50毫升冰冷管中。然后,向细胞悬液中加入 20 毫升含有 2%FBS 培养基的 M1 99。将试管以 500 G 在 4 摄氏度下离心 5 分钟。
弃去上清液后,将沉淀重新悬浮于M1 99和2%FBS培养基中。