首先，从小鼠身上分离出股骨、胫骨、骨盆和肱骨。用手术刀切开长骨的生长板，切除骨骺。将其放入 10 厘米的培养皿中，加入 M199 培养基和 2%FBS 在冰上。
接下来，使用 28 号针头和 10 毫升注射器填充 M199 培养基和 2% FBS，将骨髓冲洗到冰上的 15 毫升管中。将冲洗的骨头与骨骺一起放入培养皿中。将 15 毫升管直立在冰上，直到骨髓沉淀。
然后取出 M199 培养基加 2% FBS，将 4 毫升 B&M 解离混合物加入 15 毫升管中，并在 37 摄氏度水浴中孵育。孵育后，收集上清液并通过 70 微米细胞过滤器过滤到冷的 50 毫升管中。将两毫升新鲜的 B&M 解离混合物加入剩余的骨髓沉淀中，然后将其返回到水浴中。
使用 1 毫升移液管，用力移液任何剩余的骨髓碎片。像以前一样将所有细胞悬液收集在同一管中。向细胞悬液中加入 20 毫升含 0.5% BSA 的 M199 培养基和 2 毫摩尔 EDTA。
之后，将细胞以 500 G 的速度在 4 摄氏度下离心 5 分钟。将沉淀重悬于含有 0.5% BSA 和生物素抗体的 500 微升 PBS 中。在室温下，在黑暗中在轨道振荡器上孵育 10 分钟。
接下来，彻底涡旋磁珠。将 25 微升珠子加入试管中，然后在轨道振荡器上再次孵育。将试管放入匹配的磁铁中两到三分钟，然后将上清液收集到新试管中。
使用 50 毫升管的扁平盖端在 10 厘米的培养皿中将骨头切成小块。通过 70 微米细胞过滤器过滤上清液以分离骨碎片。用剪刀剪下细胞过滤器中的骨头碎片。
将装有骨头碎片的过滤器放在 50 毫升的管子上，然后用手术刀打开过滤器。用镊子将骨头部分转移到五毫升的小鼠B&M解离混合物中。然后将试管水平放入 37 摄氏度的水浴中，以 120 RPM 的速度摇晃 30 分钟。
消化后，加入 25 毫升含 0.5% BSA 和 2 毫摩尔 EDTA 的 M199 培养基。通过 70 微米细胞过滤器将含有基质细胞的上清液过滤到冷的 50 毫升管中。
