从人脑类器官中分离单细胞进行单细胞RNA测序

首先，在六孔板的一个孔中收集多达五个由诱导多能干细胞产生的人脑类器官。吸出多余的培养基，并用PBS洗涤类器官一次。使用手术刀将类器官彻底切碎。

将酶混合物之一添加到切碎的类器官中，并在 37 摄氏度下与 20% 氧气和 5% 二氧化碳以 90 RPM 的速度孵育 10 至 15 分钟。使用 1000 微升移液器吸头混合类器官悬浮液。然后加入酶混合物两种，在 37 摄氏度下孵育 10 至 15 分钟。

通过加入 10 毫升终止溶液来停止解离。在 70 微米细胞过滤器上过滤细胞悬浮液。将过滤的细胞悬液以 300 G 在 4 摄氏度下离心 10 分钟。

吸出上清液，并将沉淀重新悬浮于四毫升冷的0.04%BSA中。现在在 40 微米细胞过滤器上过滤细胞悬液，并在细胞计数器上对细胞进行计数。离心所需量的细胞悬浮液，吸出上清液，并根据基于微流体的 scRNA-Seq 试剂盒手册将沉淀重新悬浮于 NSB 加培养基中。