从人脑类器官中分离单核用于单核RNA测序

首先，将诱导多能干细胞产生的四个人脑类器官转移到含有冷冻 PBS 的六孔板中。将每个类器官切成四块。使用剪刀剪下 1， 000 微升移液器吸头的尖端，然后用它将类器官碎片转移到 2 毫升的吸管中。

完全吸出 PBS 并加入 1 毫升 NP-40 裂解缓冲液。用杵A轻怡三次，然后用杵B轻杵，将悬浮液转移到15毫升离心管中。用一毫升裂解缓冲液洗涤缓冲液，并将溶液转移到离心管中。

在室温下孵育 5 分钟后，将类器官悬浮液以 500 G 离心 5 分钟。吸出上清液，在管中留下 50 微升。将 1 毫升 NSB Plus 培养基加入试管中。

五分钟后，混合以重悬颗粒。在试管中制备 Percoll 梯度后，将类器官悬浮液层放在其顶部。接下来，将分层类器官悬浮液以 500 G 在 4 摄氏度下离心 5 分钟。

吸出上清液并将沉淀重悬于NSB Plus培养基中。在 40 微米细胞过滤器上过滤细胞核溶液。然后，使用DAPI对细胞核进行染色，并在Neubauer室中对其进行计数。

根据基于微流体的 snRNA-seq 试剂盒手册，离心所需量的细胞核溶液并将沉淀重悬于 NSB Plus 培养基中。