首先，准备SDS-PAGE凝胶。旋转解冻的标记物和制备的细胞热位移测定样品。向第一个孔中加入 2.5 微升标记物，向其余每个孔中加入 20 微升样品。
然后，以 80 伏电压运行凝胶。接下来，将 850 毫升超纯水、100 毫升无水乙醇和 50 毫升快速转印缓冲液加入烧杯中，搅拌均匀。根据凝胶的大小切割聚偏二氟乙烯或PVDF膜，并进行标记。
然后，将其浸泡在甲醇中 30 秒以激活它。将转印夹、海绵垫和三层转印滤纸放入装有转印缓冲液的托盘中。电泳完成后，从电泳装置中倒出电泳溶液并取出板。
用塑料刀轻轻去除凝胶并切开，以清楚地看到蛋白质标记物和靶蛋白。在跨膜溶液中洗涤凝胶后，将其平放在滤纸上。将活化的 PVDF 膜浸入转移溶液中。
用镊子握住标记的一面，并面朝下盖住凝胶。然后，将组装好的转移装置放入转移罐中。将剩余的跨膜溶液加入跨膜盒中。
调整电流和时间，然后按运行在室温下开始传输。现在，将 6 毫升含 TBST 的 5% BSA 溶液加入培养箱中。转移完成后，从设置中取出 PVDF 膜，同时夹紧标记侧并将其放入培养箱中。
从培养箱中取出 BSA 溶液后，加入 6 毫升一抗。将培养箱放入装有冰袋的泡沫盒中过夜，同时摇晃。第二天，将一抗收集在试管中，并用 6 毫升 TBST 溶液洗涤膜。
然后，向孵育箱中加入 6 毫升二抗。在孵育结束时，收集二抗并用 TBST 洗涤膜五次，如前所述。混合等体积的化学发光试剂 A 和 B.打开凝胶成像系统。
单击“样本”，检查校准，然后等待校准完成。然后，单击标记并检查校准。现在用镊子拾取试纸的标记侧，并完全浸入化学发光试剂溶液中。
夹住标记的一侧，将条带正面朝下放入成像仪中，然后合上成像仪的盖子。将曝光时间设置为一秒，然后单击“捕获”。点击保存。
为图像命名并将其另存为 TIFF 文件。细胞热位移试验表明，与二甲基亚砜基团相比，Xanthatin 在 48 至 57 摄氏度的温度范围内显着改变了 Keap1 蛋白的热稳定性。
