首先,将 30 微升刀豆球蛋白 A 珠加入 1.5 毫升离心管中。吸取 300 微升结合缓冲液到珠子上。将试管多次倒置以充分混合,然后将试管放在磁性架上。
溶液澄清后,用移液管吸出上清液。从架子上取出后,将 300 微升结合缓冲液移液到试管中。再次倒置以混合管中的内容物。
将试管的内容物均匀地分布到三个管中,每个管子有八个PCR管条,然后将管条放在磁性架上,直到溶液澄清。除去上清液后,将 10 微升结合缓冲液移液到试管中并混合。将准备好的珠子放在冰上,直到进一步实验。
接下来,将培养的小鼠成肌细胞从平板上胰蛋白酶消化。细胞离心后,使用真空吸尘器除去上清液。然后将沉淀重悬于PBS中。
在对悬浮液进行细胞计数后离心细胞,然后将沉淀重悬于足够体积的洗涤缓冲液中,以产生每毫升 700, 000 个细胞的细胞密度。将 100 微升该细胞悬浮液移液到 PCR 管条的每管中并充分混合,然后将管条在室温下放在跷跷板运动振荡器上 10 分钟,让刀豆球蛋白 A 珠捕获细胞。在移出上清液之前,在磁性架上再次澄清试管的内容物。
最后,在显微镜下观察上清液,以评估刀豆球蛋白-A珠子与细胞结合的功效。