首先,称量两毫升管,并将初始重量记录为 w0。收获共培养的拟南芥根组织,并在无菌水中洗涤三次。将根放在滤纸上以去除多余的水。
将根转移到预先称重的微量离心管中。用管称量根部,并将其记录为w1。接下来,向试管中加入 1 毫升 PBS,以最大速度涡旋 8 分钟。
将含有根定植细菌细胞的悬浮液从 1 乘 10 稀释到阴性 1 到 1 乘 10 到阴性 5 号。将稀释的细菌悬浮液铺在Luria-Bertani琼脂平板上,并在37摄氏度下孵育10小时。孵育后,计算Luria-Bertani琼脂平板上的细菌菌落。
根据相应的稀释度计算菌落形成单位,并用根鲜重对数据进行归一化,得到每克根定植的细菌细胞计数。在接种后两天,野生型 SQR9 芽孢杆菌和衍生突变体 delta 8mcp 的定植表明 delta 8mcp 的根定植显着减少,表明该条件和方法在测量细菌定植方面的有效性。