双碘沙醇离心纯化腺相关病毒用于体内研究

首先，从培养的细胞中获得澄清的病毒。将超速离心管放置在多通道蠕动泵输出侧的架子上。使用血清移液管，小心地将10毫升澄清的病毒分配到每个超速离心管中。

然后，将 22 毫升 15% 碘克沙醇部分转移到干净的 50 毫升锥形管中。将泵右侧的毛细管放入管中并启动泵。停止泵。

当碘克沙醇级分到达泵输出侧毛细管末端时，将输出毛细管插入每个装有澄清病毒的超速离心管中并启动泵。当 15% 馏分中的最后一个即将被吸入输入毛细管时停止泵。接下来，将22毫升25%碘克沙醇馏分转移到15毫升锥形管中。

打开泵后，将整个馏分吸入输入毛细管并停止泵。如果需要，添加更多的 60% 馏分，并填充每个试管，直到裂解物在顶部形成圆顶但不会溢出。停止泵并小心地取出输出毛细管。

用垫片盖住超速离心管，然后将其装入 70 型 TI 转子中。离心后，将超速离心管夹在支撑架上。使用无绒擦拭布，从超速离心管上取下盖子。

然后，将 20 号针头连接到 5 毫升注射器上，并用针头穿透超速离心管壁，距离 40% 和 60% 碘克沙醇界面约 3 毫升。缓慢吸出界面和部分 40%馏分。将一根手指放在超速离心管的开口顶部，拉出注射器并将吸入的 AAV 馏分转移到 50 毫升锥形管中。

最后，将吸出的病毒组分在AAV裂解缓冲液中稀释两倍至40毫升的体积。冲洗蠕动管后，将 20 毫升稀释的 AAV 馏分加载到新的超速离心管中进行第二轮分馏。