制备用于延时成像的小鼠脑切片以确定细胞动力学

首先，获得用适当质粒施用的安乐死小鼠。对于培养皿制备，将 1.9 mL 培养基添加到玻璃培养皿中，并小心地将细胞培养小室放在其上。然后将 500 微升培养基添加到过滤器上并将其置于冰上。

取出胚胎并将它们放入含有冰冷 PBS 的培养皿中。在显微镜下，根据绿色荧光蛋白或其他荧光标志物的表达选择胚胎。解剖大脑后，将其放入冷冻模具中取出的熔融琼脂糖凝胶中，并滚动数次。

琼脂糖在室温下凝固后，将其置于冰上。使用振动切片机，将大脑冠状切片至 350 微米的厚度，然后将它们排列在过滤器上。然后从滤杯内外去除 600 微升培养基。

5 分钟后，向细胞培养小室内侧添加 100 μL 新鲜培养基。对于延时成像，使用长工作距离 20 倍镜头采集大约 10Z 堆栈图像。对小鼠大脑延时图像的分析提供了 EGFP 阳性迁移细胞和 RFP 阳性迁移细胞从 2 小时到 21 小时的轨迹。