优化人肠道样蛋白培养以进行生物发光检测

首先，将人肠道样体 （HIE） 传代所需的所有材料安排到工作平台上。将HIEs与生长因子还原的3D培养基质混合。将混合物接种到 24 孔板上，每孔 3 滴 10 微升 3D 培养基质，并在 37 摄氏度下孵育 20 分钟。

然后加入 350 微升 HIE 生长培养基。七天后，从四个孔中收集HIE到1.5毫升管中。将 HIE 以 2000g 离心 40 秒以除去碎屑。

使用移液器，从试管中取出过多的3D培养基质。将 0.5 毫升冷 PBS 加入管中。使用 1 毫升胰岛素注射器，通过注射多达 10 次来施加物理湍流以解离 HIE。

将解离的HIE以2000g离心40秒，然后轻轻除去上清液。然后将试管放在冰上约三分钟。将生长因子还原的 3D 培养基质添加到试管中，并将其与沉淀混合。

将 HIE 混合物播种在 35 毫米圆形培养皿中心的 3D 培养基质中。将培养皿在 37 摄氏度下孵育 20 分钟，以固化 3D 培养基质。然后向培养皿中加入 2 毫升预热的肠道类器官生长培养基，并在 37 摄氏度下与 5% 二氧化碳孵育 48 小时。

在第三天，用 2 毫升预热的分化培养基替换生长培养基，并在 37 摄氏度下用 5% 二氧化碳孵育 48 小时。第五天，用 2 毫升预热的分化培养基替换肠样培养基，并继续孵育 24 小时。