同步人肠道肠道中的昼夜节律以进行生物发光监测

首先从培养箱中取出含有差异化 HIE 的培养皿。为了同步肠道生物的分子钟，向培养皿中加入两微升 100 微摩尔地塞米松，并在 37 摄氏度下与 5% 二氧化碳孵育一小时。在孵育过程中，将光度计的二氧化碳百分比和温度分别设置为 5% 和 37 摄氏度。

时钟同步后，用含有 200 微摩尔 D-荧光法的 3 毫升预热分化培养基补充肠道样体。将培养皿放在培养发光计的八孔培养皿台上，并用盖子盖住样品培养皿台。将两个装有湿纸巾或海绵的加湿室放在样品台的顶部，并盖上机器的盖子。

在生物发光软件上，单击“条件”选项卡以调整培养皿数量、测量时间、后台处理和滤光片类型的设置。然后单击“确定”以保存设置。若要开始实验，请单击“运行”选项卡，然后单击“开始”按钮。

然后单击屏幕顶部的原始噪声过滤或去趋势选项卡，以观察所选数据的信号。录制后，单击停止按钮停止运行。转到文件选项卡，选择另存为并以 Kronos 格式保存数据。

最后，单击文件并选择导出为Excel格式以将数据导出到电子表格。生物发光记录评估了HIEs在干细胞富集和分化诱导条件下的昼夜节律性。四年快速变换分析表明，在不同条件下，B MAL一荧光素酶生物发光表现出稳健的昼夜节律振荡，平均周期性为22.92 h。

相比之下，HIEs在干细胞富集的条件下表现出昼夜节律紊乱。