用于 秀丽隐杆线虫 培养的 OP50 的制备

首先，用氨苄青霉素和两性霉素 B 接种 5 毫升 LB 中的单个 OP50 菌落，并在 37 摄氏度下在细菌摇床中孵育约 6 小时。一旦培养物变得浑浊，用氨苄青霉素和甘油在 250 毫升 TB 中将 OP50 的孕前培养物稀释 1 至 2， 000。然后将 OP50 液体培养物转移到无菌离心管中。

将试管在 4 °C 的台式离心机中以 3， 100 G 离心 15 分钟。弃去上清液，在离心前将 OP50 沉淀重悬于无菌水中。第二次洗涤后，弃去上清液，将 OP50 沉淀重悬于无菌水中至 50 毫升的体积。

将其转移到预先称重的 50 毫升锥形管中。将试管离心 20 分钟，使 OP50 沉淀。离心结束时，小心去除所有剩余的上清液，确保试管中没有水残留。

通过从带有沉淀的离心管的重量中减去空离心管的重量来计算沉淀的重量。将 OP50 沉淀在 S-完全缓冲液中彻底重悬，以达到 100 毫克/毫升的浓度。在琼脂平板上测试 OP50 悬浮液以检查是否有任何污染。

将 OP50 悬浮液储存在 4 摄氏度的 S-complete 缓冲液中。