在亚微米尺寸囊泡中封装用于 ATP 循环和甘油 3-P 合成的代谢网络

首先，将 92.7 微升缓冲液 A 移液到一个 1.5 毫升的空管中。然后加入 DTT、ADP 钠、氯化镁、L-鸟氨酸和酶。轻轻混合溶液后，将其添加到 66.6 微升预形成的蛋白脂质体之上。

将混合物在液氮中快速冷冻，然后在大约 10 摄氏度的水冰浴中解冻。将挤出机中的封装混合物通过用缓冲液 A、DTT、ADP 钠和 L-鸟氨酸预平衡的过滤器 13 次，并将挤出溶液收集在 1.5 毫升管中。为了确定 ATP 的合成，将移液管缓冲液 K、蛋白脂质体和离子载体放入带有小窗口的黑色石英比色皿中。

在荧光计中将样品预热至 30 摄氏度。现在，获取 perceval HR 的激发光谱。当探针信号恒定时，加入过量的 L-精氨酸和甘油以启动代谢网络并随着时间的推移跟踪反应。将 L-精氨酸添加到蛋白脂质体中导致 500 纳米和 430 纳米激发下的感知 HR 荧光比率急剧增加。