首先,将切开的 200 微升移液器吸头底部插入预制的微流体捕获装置中。移液器使用配备 0.2 微米过滤器的注射器将 400 微升 β-酪蛋白溶液注入芯片的入口储液器中。将芯片以 900 G 离心 6 分钟。
现在,入口和出口的液位应该相等。在两台物镜载玻片上画出垫片的轮廓。用高氧等离子体清洁载玻片一分钟,使其具有亲水性。
在载玻片顶部加入低胶凝温度的琼脂糖,直到它完全被琼脂糖覆盖。然后将载玻片倾斜 90 度角,并将多余的琼脂糖排到组织上。将载玻片置于 50 摄氏度下 30 分钟。
使用配备一毫米探头的手持式探针超声仪,对制备的蛋白脂质体进行超声处理。将 proteo SUV 放在冰上 30 秒,然后重复超声处理 5 次。用100微升注射器,将0.5微升的proteo SUV液滴沉积在准备好的琼脂糖凝胶上。
使用氮气流约 10 分钟干燥液滴。用注射器和针头,通过侧面的小孔将溶胀溶液移液到准备好的腔室中,并让囊泡在 22 摄氏度下膨胀至少 30 分钟。在固体表面上敲击腔室,从凝胶中收获 GUV。
为了捕获 GUV 进行显微镜检查,请在显微镜上安装钝化微流体芯片。检查有缺陷后,用弯曲的针将管子连接到储液罐出口。将另一端连接到一毫升注射器后,将注射器安装到最大流速为每分钟 10 微升的泵上。
用新鲜培养基替换储液罐的洗涤缓冲液。用至少 80 微升缓冲液 P 洗涤,去除多余的缓冲液后,将蛋白 GUV 添加到储液器中。随着时间的推移监测芯片,直到有足够的 GUV 被困在芯片中。
用移液器吸出多余的 GUV 溶液。然后以每分钟 0.1 至每分钟 1 微升的流速加入洗涤缓冲液 P。最后,用足够量的囊泡定位陷阱。
将设置应用于显微镜后,以每分钟 0.5 微升的流速向储液器中加入缓冲液 R。干燥的蛋白质LUVs在低凝胶温度的琼脂糖凝胶上的再水化导致微米大小的囊泡的形成。GUV 被收获并捕获在 β 酪蛋白钝化微流控装置中。