通过精确的定位和注射技术在小鼠中接种肿瘤细胞

麻醉并去除小鼠的毛发后，将其放在包裹在高压灭菌器手术垫中的加热垫上。轻轻地伸直身体，沿着脊柱提起皮肤。使用手术记号笔在小鼠的一侧帐篷皮肤中心画一个点。

在BXPC培养后，三个人胰腺癌细胞系生长两周。从培养箱中取出烧瓶，将其放入生物安全柜中。吸出培养基并用 5 毫升 PBS 洗涤细胞。

将 5 毫升细胞解离剂加入烧瓶中，并在 37 摄氏度下用 5% 二氧化碳孵育 6 至 7 分钟。将细胞悬液转移到 15 毫升管中，并以 500 G 离心 5 分钟。去除上清液后，将细胞重悬于完全生长培养基中。

使用血细胞仪，确定细胞浓度和总细胞计数。将含有250， 000个细胞的1.5毫升悬浮液每只小鼠离心，以500G接种5分钟。除去上清液后，将沉淀重悬于每只要接种的小鼠10微升PBS中，并将试管置于冰上。

使用冷冻移液器吸头，将溶解的基底膜加入试管中。将冷冻的 29 号胰岛素针装入 20 微升细胞悬液中，并将注射器置于冰上。将针头插入鼠标上的标记点约一厘米处，然后将针头在皮肤下移动，直到它位于标记处，针头的斜面朝上。

注射 20 微升细胞悬液并等待 45 秒，然后取出注射器。将小鼠从麻醉中取出后，等到它变得可以走动时再返回其家庭笼子。