追踪从小鼠次级淋巴组织中分离的活化T细胞的迁移

首先，对从小鼠次级淋巴组织中分离的活 T 淋巴细胞进行延时成像。对于 T 细胞迁移分析，打开 Velocity 软件并创建一个新的图像序列。在 Velocity 中选择所有时间延时视频显微镜电影并将其移动到蓝色区域。

利用对比度增强工具，修改亮度和对比度，然后将图像尺寸调整为 0.325 微米（20 倍）和 0.65 微米（10 倍放大）。配置序列以设置时间点后，转到测量选项卡并取消选中所有时间点。接下来，使用强度找到对象，并将条形滑到峰值的右侧。

为避免细胞碎片，请排除所有直径小于 10 微米且直径大于 100 微米的细胞。选中忽略静态对象，然后自动加入断开的轨道。要保存新协议，请转到测量。

单击“保存协议”，然后单击“新协议”名称。在“测量”选项卡中，单击“测量所有时间点”，并按时间跨度从高到低对轨迹进行排序。在记录具有良好轨迹的单元格的轨迹 ID 号后，将文件导出为逗号分隔的文本，并将数据传输到所需的分析软件。

要执行手动跟踪，请打开图像 J，转到插件，然后选择跟踪和手动跟踪。设置时间间隔 X x Y 校准、像素大小和 Z 校准。接下来，单击“添加轨道”以开始单个单元格跟踪。

在第一个时间点选择一个单元格，并在所有时间点继续选择。最后，单击结束轨道。软件辅助细胞追踪，表征激活的单个 T 细胞的迁移行为，由不同颜色的线表示。