将细胞和纳米颗粒封装成液滴用于荧光成像

首先，在 1 毫升注射器中加入 500 微升连续相。将 PTFE 微管连接到 27 号 0.75 英寸针头上。将组件安装到注射器上，然后安装到注射泵上。

然后使用 0.75 毫米的活检打孔器在 PDMS 切口的中间打一个孔。将大约 3 厘米的 PTFE 管穿过切口上的孔，然后将组件推入 200 微升移液器吸头的顶部。在移液器顶部用 UV 固化胶密封连接器，并将试管的另一侧连接到 23 号 1.25 英寸针头上。

接下来，在两个 1 毫升注射器中加入 500 微升轻质矿物油。使用定制的附件连接两个 23 号针头，并将它们安装到注射泵上。使用注射泵控制软件，将功能化的纳米颗粒和细胞溶液吸入水相的移液器吸头中。

清洁准备好的观察室后，将观察室以 30 度夹入装有两个钕磁铁的印刷室支架中。现在，打开两个端口并在上端口塞上纸巾，以吸收填充过程中多余的外相。将连续相连接到微流控芯片的顶部入口。

然后，以 1800 μL/h 的流速用连续固定相冲洗芯片约 30 秒。将水溶液的移液器吸头连接到芯片的两个中间入口。每种溶液以每小时 200 微升的速度开始水溶液流动。

一旦液体出现在出口处，就以每小时 800 微升的速度开始氟化油相流。等待建立稳定的液滴产生，由出口处均匀的灰色、有光泽的溶液指示。然后将 PTFE 微管连接到出口以收集液滴。

使用手紧式一体式接头的密封垫圈模块，将它们引导至观察室中。腔室装满后，停止液流并使用手紧压力用端口塞关闭端口。液滴产生后，用氟化油冲洗芯片，然后用氮气冲洗，以吹出任何残留的液体。

将腔室支架安装在带有孔板格式载物台的显微镜上。然后，使用 10 倍物镜，将显微镜切换到明场通道。聚焦于明场中固定的液滴，然后移动到腔室的中心。

然后，激活自动对焦系统。调整明场通道上的测量平面，使液滴边缘显示为清晰的黑色圆圈，很容易与油相和背景区分开来。遍历每个荧光通道，为它们设置最佳测量平面。

对于重定位测量，请关注 FITC、TRITC 和 Cyanine5 通道中的纳米颗粒聚集体。