人脑膜细胞 （HMC） 条件培养基的制备和脑脊液的收集，用于循环肿瘤细胞的培养

首先，用 Poly-L-赖氨酸预涂 T175 培养瓶。将培养瓶放入 37 摄氏度的培养箱中 1 小时。现在使用无菌血清移液管吸出赖氨酸溶液。

将 30 毫升含有人脑膜细胞的完全脑膜培养基移液到培养瓶中。在 37 摄氏度下在 5% 二氧化碳补充下孵育细胞。当细胞达到大约 75% 至 80% 的汇合度时，收集 HMC 培养基并将其保存在 50 毫升锥形管中。

然后以 1：1 的比例将完全脑膜培养基添加到试管中。最后，将生长因子移液到试管中以制备 HMC 条件培养基。要处理脑脊髓液，首先将其放入冰上的 15 毫升锥形管中以冷却。

在预冷的离心机中以 257 G 和 4 摄氏度离心液体 5 分钟。在不干扰细胞沉淀的情况下移出上清液，并将其分装在不同的试管中。现在向细胞沉淀中加入 1 毫升 PBS 以使其重新悬浮。

将细胞在 4 摄氏度下以 1， 500 G 离心 5 分钟。吸出 PBS 上清液，同时在管底部留下约 50 微升。在培养细胞之前，使用细胞悬液进行细胞计数。

几种生长因子在用人脑膜细胞培养的培养基中上调。